El sustrato de cultivo para setas es una mezcla de sustancias de alto valor nutritivo para una amplia gama de bacterias y esporas de otros hongos, estos microrganismos pueden acceder sin dificultad a los nutrientes que forman el sustrato; Si este fuera inoculado sin ser previamente esterilizado seria muy probable que estos microrganismos lograran invadir la totalidad del sustrato a una velocidad mucho mayor que la del micelio de la seta que se intenta cultivar.
Una segunda razón, el micelio de una seta adsorbe nutrientes del sustrato y si en este crecen microrganismos que liberen toxinas estas podrian ser absorbidas por el micelio cultivado, haciendo toxicas nuestras setas; es por estas dos razones necesitamos darle un tratamiento quimico o fisico que elimine la totalidad de microrganismos competidores antes de inocular el sustrato de cultivo.
Esterilización por calor humedo
El calor húmedo logra la destrucción de microorganismos por coagulación de sus proteínas celulares y por la fusión de los lípidos que forman las membranas celulares; la esterilización por vapor a presión es el método mas efectivo de esterilización por calor húmedo, se lleva acabo en un autoclave; dentro de estos costosos equipos se emplea vapor de agua a una presión de 15 psi o bien 103.4 kPa lo que permite que en la cámara interna el vapor alcance una temperatura de 121ºC.Los autoclaves deben someterse a pruebas de control para comprobar su correcto su funcionamiento; esporas del Bacillus Stearothermophilus son usadas comúnmente como organismo de validación porque son mucho mas resistentes a condiciones adversas que la forma vegetativa de la bacteria; las esporas de esta bacteria termófila mueren1 a 115ºC mientras que la forma vegetativa de la bacteria puede vivir en temperaturas de 30ºC a 70ºC.2
Esterilización sin autoclave
Dado que los autoclaves son costosos, es posible que inicialmente no se logre adquirir uno; sin embargo la mayoría de las ollas de presión caseras logran a temperaturas entre3 112ºC y 118ºC; este rango de temperatura logra matar incluso las esporas de B. Stearothermophilus, lo que indica que una olla de presión casera cumple perfectamente con las condiciones para esterilizar el sustrato de cultivo.Elección de la olla de presión
Para asegurarse de comprar la olla de presión que consigue una mayor temperatura, la norma oficial mexicana NOM-054-SCFI-1998 servirá de guía; esta norma exige a todas las ollas a presión estar marcadas o grabadas en alto o bajo relieve, en idioma español y en forma legible, con letras de un tamaño mayor a 3mm, con la siguiente información obligatoria:- Marca registrada del fabricante.
- Leyenda “Hecho en México” o, en su caso, país de origen.
- Presión manométrica de trabajo nominal en kilopascales (kPa) o sus múltiplos.
- Capacidad nominal en litros.
- Fecha o periodo de fabricación o número de lote.
Metodología para usar la olla de presión de forma correcta
- Asegurarse de que haya un buen nivel de agua en el fondo de la olla de presión, aproximadamente 3 cm.
- Introducir el material que se va a esterilizar procurando que quede bien colocado para evitar algún problema, dejar las tapas flojas de los frascos o bien las bolsas abiertas, entonces colocar la tapa de la olla de presión ajustándola bien.
- Encender la fuente de calor.
- A medida que suba la temperatura del agua, empezará a salir una mezcla de vapor-aire por la válvula de salida de vapor, aumentando la temperatura en el interior hasta alcanzar 118ºC o mas.
- El tiempo de esterilización se debe comenzar a contar cuando cuando la salida de vapor es fuerte, constante y audible.
- Transcurridos el tiempo adecuado, apagar la fuente de calor y dejar que la olla se enfríe sola sin abrir la válvula de salida de vapor, hasta que la presión haya bajado.
Tiempo adecuado de esterilización
La temperatura y el tiempo de estancia en la olla de presión varían en relación al volumen del sustrato, contenido de humedad y otras variables. A continuación algunos tiempos de esterilización comprobados.| Medios de cultivo liquidos. 4 | ||
| Tubo de ensayo. Erlenmeyer 125 ml. Erlenmeyer 2 lt. Frasco 9 lt. | 10 ml. 95 ml. 1,500 ml. 6,750 ml. | 15 min. 15 min. 30 min. 70 min. |
| Medios de cultivo solidos. 5 | ||
| Pasteles de vermiculita y arroz. Grano (rehidratado) Grano (rehidratado) Grano (rehidratado) Madera, astillas. | frascos 250 ml. frascos 1000 ml. frascos 2000 ml. frascos 9000 ml. frascos 1500 ml. | 45 min. 90 min. 90 min. 150 min. 90 min. |
1 Geosta Bylund, M. (2003) Manual de industrias lacteas. Madrid: Ediciones Mundi-Prensa. ISBN 84-8476-094-4. 2 Stainer, R. Y. (1992) Microbiologia. (2ª ed) Barcelona: Reverte. ISBN 84-291-1868-3. 3 Profeco (2000, Marzo) Revista del consumidor (México) Estudio de calidad: ollas de presión 00(277) Recuperado de http://www.profeco.gob.mx/revista/pdf/est_00/ollas.pdf 4 Tortora Gerard, J. (2007) Introduccion a la microbiología (9a ed.) Argentina: Medica Panamericana S.A. ISBN: 978-950-06-0740-7- 5 Nicholas, L.G. & Ogamé, K. (2006) Psilocybin Musroom Handbook. Canada: Quick American ISBN: 978-0932-55171-9
